DB13∕T 5127.16-2019 植入性医疗器械高分子材料浸提液中有毒有害物质的测定 第16部分：生物负载薄膜过滤法.pdf 8页

ICS11.120.20C30DB13河北省地方标准DB13/T5127.16—2019植入性医疗器械高分子材料浸提液中有毒有害物质的测定第16部分：生物负载薄膜过滤法2019-12-27发布2020-01-28实施河北省市场监督管理局发布 DB13/T5127.16—2019前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。DB13/T5127《植入性医疗器械高分子材料浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分：——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量原子吸收分光光度法；——第2部分：二巯基丙醇迁移量碘量法；——第3部分：葡萄糖迁移量碘量法；——第4部分：柠檬酸迁移量酸碱中和滴定法；——第5部分：硫氰酸胍迁移量分光光度法；——第6部分：丙酮迁移量气相色谱法；——第7部分：丙交酯迁移量气相色谱法；——第8部分：对苯二甲酸迁移量高效液相色谱法；——第9部分：乙醇迁移量气相色谱法；——第10部分：环氧乙烷迁移量气相色谱法；——第11部分：戊二醛迁移量高效液相色谱法；——第12部分：异氰酸酯迁移量高效液相色谱法；——第13部分：甲醛迁移量气相色谱质谱联用法；——第14部分：蛋白质迁移量可见-紫外分光光度法；——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量电感耦合等离子体质谱法；——第16部分：生物负载薄膜过滤法。本部分为DB13/T5127的第16部分。本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院。本部分主要起草人：康莉、刁立琴、付钊、高保栓、冯毅。I DB13/T5127.16—2019植入性医疗器械高分子材料浸提液中有毒有害物质的测定第16部分：生物负载薄膜过滤法1范围本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中生物负载的测定方法。本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中生物负载的测定和验证。本标准适用于具有一定生物负载水平的植入性医疗器械。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T19973.1医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定3方法原理选择适宜的洗脱方法对试样上自然污染的微生物进行洗脱处理，将洗脱液进行薄膜过滤，并对滤膜进行培养计数，得到试样上洗脱的微生物总数。再用重复回收法确定试样的修正系数。最后，通过修正系数对试样上洗脱的微生物总数进行修正，从而确定试样上的生物负载水平。4试剂与材料4.1胰酪大豆胨琼脂培养基。4.2沙氏葡萄糖琼脂培养基。4.30.9%氯化钠注射液。5仪器与设备5.1压力蒸汽灭菌器。5.2洁净工作台。5.3生化培养箱。5.4电子天平5.5拍击式无菌均质器。5.6恒温振荡器。5.7过滤装置。1 DB13/T5127.16—20195.80.45μm无菌微孔滤膜。6试验步骤6.1微生物采集6.1.1袋蠕动法该洗脱方法尤其适用于软质、纤维和/或吸附性材料，但可能不适用于能刺破袋的任何材质（如带针或含有坚硬部分的器械）。将试样和已知体积的洗脱液装在一无菌均质袋中，设定均质器的洗脱参数，推荐将洗脱参数设定为拍击频率6次/秒，运行时间60s，启动均质器，使洗脱液贯穿试样内外。6.1.2机械振摇法该洗脱方法为通用方法，适用于大多数材料和样品。将试样和已知体积的洗脱液装在一无菌容器中，设定振荡器的洗脱参数，推荐将洗脱参数设定为振摇频率200r/min，运行时间60s，开启振荡器进行振摇洗脱。6.2菌落总数测定6.2.1试样制备在无菌环境下，打开至少5个包装，从每个包装中取样，准确量取3份样品，每份10g±1g或10022cm±10cm（以内外总表面积计），分别为样1、样2、样3。6.2.2试样洗脱将3份试样分别放入3个无菌均质袋/或无菌容器中，向每个无菌均质袋/或无菌容器中加入100mL洗脱液，按设定好的参数对试样分别进行洗脱。6.2.3移至培养基对洗脱液进行薄膜过滤。将每份试样的洗脱液分别通过薄膜过滤等量完全过滤到两张滤膜上，每张滤膜再用100mL0.9%氯化钠注射液进行冲洗。将滤膜菌面朝上分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板和沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。6.2.4培养计数将3个胰酪大豆胨琼脂培养基平板置30℃～35℃生化培养箱中培养3d～5d，将3个沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20℃～25℃生化培养箱中培养5d～7d。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。6.2.5结果计算每个试样洗脱的菌落总数按公式（1）计算。Xi=2（Ai+Bi）……………………………………………………（1）式中：Xi--第i个试样洗脱的菌落总数，CFU；Ai--第i个试样胰酪大豆胨琼脂培养基平板菌落数，CFU；Bi--第i个试样沙氏葡萄糖琼脂培养基平板菌落数，CFU；2 DB13/T5127.16—2019i=1,2,3。3个试样洗脱的平均菌落数按公式（2）计算。X=（X1+X2+X3）……………………………………………………（2）式中：X--3个试样洗脱的平均菌落数，CFU。6.3修正系数测定6.3.1试样制备在无菌环境下，打开至少5个包装，从每个包装中取样，准确量取3份样品，每份10g±1g或10022cm±10cm（以内外总表面积计），分别为样a、样b、样c。6.3.2试样洗脱在无菌环境下，将3份试样分别放入3个无菌均质袋/或无菌容器中，向每个无菌均质袋/或无菌容器中加入100mL洗脱液，按设定好的参数对试样分别进行重复洗脱。每重复一次后，将洗脱液全部回收。6.3.3移至培养基对洗脱液进行薄膜过滤。将每份试样的每一次洗脱液分别通过薄膜过滤等量完全过滤到两张滤膜上，每张滤膜再用100mL0.9%氯化钠注射液进行冲洗。将滤膜菌面朝上分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板和沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。用熔化的回收培养基涂在试样表面上，让培养基变硬，然后使试样在规定的培养条件下进行培养。6.3.4培养计数将贴有滤膜的胰酪大豆胨琼脂培养基平板及涂有胰酪大豆胨琼脂培养基的试样置30℃～35℃生化培养箱中培养3d～5d，将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板及涂有沙氏葡萄糖琼脂培养基的试样置20℃～25℃生化培养箱中培养5d～7d。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。6.3.5结果计算表1中列出了重复处理过程中经过5次重复洗脱后的一组理想化数据。表1某产品重复洗脱后测得的菌落数洗脱次数产品琼脂覆盖总菌落数12345样ana1na2na3na4na5maNa=na1+na2+na3+na4+na5+ma样bnb1nb2nb3nb4nb5mbNb=nb1+nb2+nb3+nb4+nb5+mb样cnc1nc2nc3nc4nc5mcNc=nc1+nc2+nc3+nc4+nc5+mc3 DB13/T5127.16—2019根据表1的数据计算回收率，见表2。表2回收率产品回收总菌落数第1次洗脱第1次洗脱的回收率第1次洗脱的平均回收率样aNana1Qa=na1×100%/Na样bNbnb1Qb=nb1×100%/NbQ=（Qa+Qb+Qc）/3样cNcnc1Qc=nc1×100%/Nc计算中已包括了琼脂覆盖得到的菌落数。某些医疗器械可能会无法应用琼脂覆盖。采用首次洗脱后的平均回收率Q，修正系数按公式（3）计算。P=1/Q……………………………………………（3）式中：Q--平均回收率；P--修正系数。6.4生物负载的计算生物负载按公式（4）计算。Y=……………………………………………………（4）式中：22Y--每1g/10cm试样上的生物负载，CFU/g或CFU/10cm；P--修正系数；X--3个试样洗脱的平均菌落数；CFU。6.5方法说明6.5.1在某一产品的常规检验中，在试验方法没有改变的前提下，可以依据已得到的修正系数进行计算。6.5.2试验方法中的洗脱参数可根据产品特性进行调整。6.5.3准确的重复次数取决于若干因素，包括产品特性、构成生物负载的微生物和初始污染水平。预实验可用于确定重复的次数。_________________________________4